1．用6孔板培養(yǎng)細胞，待細胞生長達到60%-70%，吸出舊培養(yǎng)基，根據(jù)實驗需求處理，繼續(xù)培養(yǎng)。

2．根據(jù)實驗處理時間，把細胞培養(yǎng)液吸出至一合適離心管內，PBS洗滌貼壁細胞一次，加入適量胰酶細胞消化液消化細胞。室溫孵育至輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，吸除胰酶細胞消化液。需避免胰酶的過度消化。（注意：懸浮細胞不需要胰酶消化，直接收集到離心管即可）

3．加入步驟（2）中收集的細胞培養(yǎng)液，稍混勻，轉移到離心管內，1000g離心5min，棄上清，收集細胞，用PBS輕輕重懸細胞并計數(shù)。注意：加入步驟（2）中的細胞培養(yǎng)液一方面可以收集已經懸浮的發(fā)生凋亡或壞死的細胞，另一方面細胞培養(yǎng)液中的血清可以有效抑制或中和殘留的胰酶；殘留的胰酶會消化并降解后續(xù)加入的Annexin V-FITC導致染色失敗。

4．取5-10萬重懸的細胞，200g離心5 min，棄上清，加入195 μl Annexin V-FITC結合液輕輕重懸細胞。

5．加入5 μl Annexin V-FITC，輕輕混勻。

6．室溫(20-25℃)避光孵育10 min?？梢允褂娩X箔進行避光。

7．200g離心5 min，棄上清，加入190 μl Annexin V-FITC結合液重懸細胞。

8．加入10 μl碘化丙啶染色液，輕輕混勻，冰浴避光放置。

9．進行流式細胞儀檢測，Annexin V-FITC為綠色熒光，PI為紅色熒光。

注意：FITC為綠色熒光，此檢測方法不適用于已帶綠色熒光標簽的細胞

二、結果示例及分析

四個象限的意義

左上/P2-Q1：壞死細胞；

右上/P2-Q2：晚期凋亡細胞；

右下/P2-Q3：早期凋亡；

左下/P2-Q4：未發(fā)生凋亡的細胞。

細胞凋亡率：P2-Q2與P2-Q3象限百分率的和。